Каталог продуктов для клинической лабораторной диагностики
Гормонально-медиаторное состояние »
Аутоиммунные заболевания »
Диагностика аутоиммунных заболеваний соединительной ткани
Диагностика аутоиммунной патологии соединительной ткани
Диагностическими иммунологическими маркерами болезней соединительной ткани, безусловно, являются антиядерные антитела ( A ЯА).
Основная цель исследования АЯА - исключить системную красную волчанку (СКВ), поскольку при этом заболевании АЯА появляются в сыворотке 95% больных в течение 3 месяцев после начала заболевания. СКВ - это прототип общих или системных заболеваний, характеризующихся присутствием большого количества АТ к множеству собственных Ag . Наличие АЯА может быть связано с такими заболеваниями, как ревматоидный артрит (РА), смешанные заболевания соединительной ткани (СЗСТ), склеродермия, синдром Шегрена (СШ), дерматозы, полимиозиты, дискоидная красная волчанка (ДКВ) и другими плохо изученными синдромами, например, CREST -синдром (разновидность склеродермии в виде кальциноза, синдрома Рейно, дискинезии пищевода, склеродактилии и телеангиэктазии) и прогрессирующим системным склерозом (ПСС).
Частота положительной реакции на АЯА среди нормальной популяции составляет ~2-4%. АЯА выявляются в 93% случаев при СКВ, в 60% - при СШ, в 99% - при СЗСТ, в 40% - при РА и 15% случаев при подростковой форме РА.
К настоящему времени описано более 100 разновидностей АЯА, направленных против структур цитоплазмы и ядра ( нуклеиновые кислоты, гистоны, белки ядерной мембраны, компоненты сплайсосомы, рибонуклеопротеины, белкы ядрышек и центромер). Ag , к которым образуются АЯА, могут быть разделены на три группы:
1. истинные ядерные: двухспиральная ДНК, односпиральная ДНК, гистоны, ядерная РНК
2. экстрагируемые ядерные: Sm , n - RNP , Scl 70
3. цитоплазматические: SS - A ( Ro ), SS - B ( La ) и Jo -1. SS-A (Ro) и SS-B (La) могут локализоваться как в цитоплазме, так и в ядрах.
Основными методами лабораторной диагностики АИЗ являются: непрямая иммунофлуоресценция и иммуноферментный анализ.
Непрямая имунофлуоресценция служит высокочувствительным скрининговым методом для выявления АЯА. Сыворотка больного в серийных разведениях инкубируется с клетками или тканью-субстратом в лунках предметного стекла. Это позволяет присутствующим в сыворотке АЯА связаться с клеточными мишенями внутри клеток. Среди клеточных линий лучшим субстратом признана клеточная линия HEp -2, которая существенно улучшает чувствительность теста за счет яркой флуоресценции даже при значительных разведениях сыворотки больного, а большое, богатое эухроматином ядро позволяет точно описать тип свечения. Результат оценивается с помощью люминесцентного микроскопа. Описано более 40 типов свечения ядра клетки, но в практической работе обычно используется всего шесть: гомогенный, периферический, гранулярный, ядрышковый, центромерный и цитоплазматический. Так периферический тип свечения обнаруживается у больных с АТ к ядерной мембране и вызывается преимущественно у больных с СКВ. Следует отметить, что этот метод требует очень высокой квалификации лаборанта.
На сегодняшний день ИФА представляет собой основной метод для определения АЯА и позволяет проводить скрининговое обследование. Отличие тест-систем для скрининга состоит в том, что в инкубационную лунку помещается смесь Ag - ядерный экстракт ( ENA ). Положительный результат такого теста указывает на наличие у больного одной или сочетания нескольких разновидностей АЯА. Отрицательный результат такого теста более чем в 95% случаев позволяет исключить СКВ, лекарственную волчанку (ЛКВ), СШ, СЗСТ, СС, ДМ/ПМ. Однако использование смеси, а не одного очищенного Ag , приводит к увеличению частоты ложноположительных результатов. С другой стороны, при выделении Ag утрачивается большое количество конформационных и межмолекулярных Ag -доминант. Эта особенность скрининговых иммуноферментных тест-систем не позволяет им заменить непрямую иммунофлуоресценцию для первичного скрининга пациентов.
На практике получили широкое распространение комбинированные иммуноферментные системы выявления АЯА (комби). В ходе одного теста выявляются антитела к основным разновидностям ядерных Ag - Sm , SSA/Ro, SSB/La, Sm /RNP, Scl-70, Jo-1. Это позволяет одновременно провести широкое тестирование аутоАТ, маркеров основных АИЗ соединительной ткани. Надо учитывать, что они обычно не включают в свой состав определение АТ против dsDNA , которые выполняются отдельно.
Необходимо учитывать, что ни одна разновидность АЯА не выявляется у 100% больных. В связи с этим целесообразно применять для обследования комплекс методов, позволяющий с большей уверенностью решить диагностическую задачу. ЗАО БиоХимМак предлагает тест-системы для определения различных аутоАТ с помощью методов непрямой иммунофлуоресценции (компани z IMMCO , США), иммуноферментного анализа (компания Orgentec , Германия) и иммуноблоттинга, куда входят антигены, уже нанесенные на нитроцеллюлозную мембрану (компания Orgentec , Германия).
Справочник составлен специалистами ЗАО - "БиоХимМак".
|
