Обслуживание медицинских лабораторий. Лабораторная диагностика. Тест-системы, реактивы и оборудование. Каталог продуктов для клинической лабораторной диагностики. Аптека. Купить, реактивы, лабораторная, тест-ситемы, диагностика, экспресс, иммуноферментный, ИФА, Биохимия, лекарства, Киев, ЯроЛаб

Обслуживание медицинских лабораторий. Лабораторная диагностика. Тест-системы, реактивы и оборудование. Каталог продуктов для клинической лабораторной диагностики. Аптека. Купить, реактивы, лабораторная, тест-ситемы, диагностика, экспресс, иммуноферментный, ИФА, Биохимия, лекарства, Киев, ЯроЛаб

ASSAY DESIGN, ADALTIS, ANDA, ANK-SIA, Anthos, Axis-Shield, Beckman Coulter, BeeRobotics, Bender Medsystems, Biomedica Group, Biomerica, Bioscreen, Bioserv, Biosource, Biotrin, BioVendor, Buhlmann, CAPP, Cholestech, DBC, Diaclone, Diasorin, Dr. Fooke, DREW, DSL, Dynal, Fujirebio, CanAg, GeneScan Analytics GmbH, Hycult biotech, IBL, IDL, IDS, Immco, Immunodiagnostik, IPSOGEN, Medipan, Mikrogen, Monobind, Neogen, Nordic Bioscience, Orgentec, Peninsula, Pronto, Quidel, Savyon, Seramun, Technoclone, UVP, Vircell.

         
 
 
ЯРОЛАБ  
Обслуживание медицинских лабораторий
Контакты: тел.: (093)9596435, (063)5935173, e-mail: info@yarolab.kiev.ua
 
Цитата часа: Не важно, что вызывает болезнь, важно, что ее устраняет. (Цельс Авл Корнелий )
     
       

Каталог продуктов для клинической лабораторной диагностики

Молекулярная диагностика

Молекулярная диагностика »
Диагностика наследственных болезней

МОЛЕКУЛЯРНАЯ ДИАГНОСТИКА

Диагностика наследственных болезней

Точечные мутации, т. е. замены одного нуклеотида, являются причиной генных болезней (моногенных болезней), которые способны передаваться из поколения в поколение в соответствии с законами Менделя. К настоящему моменту описано около 4000 заболеваний, которые являются причиной детской смертности в возрастной группе до 5 лет в 8-10% случаев.

Кроме того, наличие таких мутаций вкупе с факторами внешней среды может обуславливать развитие болезней с наследственной предрасположенностью (мультифакториальных). Их диагностика осложняется размытыми симптомами, разной степенью проявления в зависимости от пола, возраста и степени влияния фактора(ов) среды.

Показано наличие наследственной предрасположенности к некоторым видам рака, сердечно-сосудистым и неврологическим заболеваниям и т. п. Так, например, риск венозной тромбоэмболии в ходе беременности возрастает в 8 раз при наличии мутаций в генах, кодирующих фактор свёртываемости крови V , протромбин или 5,10-метилентетрагидрофолат редуктазу ( MTHFR ) и существенно выше (в 10-20 раз), когда мутации присутствуют одновременно в двух факторах. У 50-65% женщин с привычной невынашиваемостью беременности обнаруживаются наследуемые формы коагулопатий, в 17% случаев преэклампсия вызвана наличием мутантной формы фактора V .

Ранняя диагностика позволяет правильно определить клинический или жизненный прогноз с выработкой некоторых рекомендаций, например, выбор диеты или терапии. Кроме того, современные методы позволяют осуществлять пренатальную или преимплантационную диагностику или скрининг носительства.

Для детектирования точечных мутаций при тестировании на генные и мультифакториальные болезни мы предлагаем наборы производства Pronto Diagnostics (Израиль). Реагенты, входящие в стандартный набор, обеспечивают:

  • предварительную амплификацию фрагмента ДНК, предположительно несущего нуклеотидную замену, методом полимеразной цепной реакции (ПЦР);
  • сайт-специфичную элонгацию олигонуклеотидного зонда;
  • детекцию результатов в микропланшете.

Технология «Пронто»

Амплифицируют ДНК (50-300 нг/мкл) с использованием праймеров, ограничивающих полиморфный по одному нуклеотиду локус (ДНК-полимераза в комплект не входит).

Непрореагировавшие нуклеотиды инактивируются.

При детекции одной мутации раствор, содержащий ампликоны, вносят в две соседние лунки ПЦР-планшета. В лунках содержатся:

    • 5’- FITC -меченый зонд, комплементарный последовательности ДНК, примыкающей к тестируемому нуклеотиду,
    • и единственный биотинилированный нуклеотид, комплементарный либо мутантному аллелю либо аллелю дикого типа. Соответствующие лунки маркированы цветом.

Планшет помещают в термоциклер и проводят несколько циклов присоединения биотинилированного нуклеотида к 3’-концу зонда. Элонгация и, соответственно, включение биотина происходит в том случае, если биотинилированный нуклеотид комплементарен тестируемому нуклеотиду в ампликоне. 

Реакционную смесь разбавляют и переносят в лунки микропланшета, к стенкам которых пришит стрептавидин. После инкубации несвязавшийся зонд (не биотинилированный на предыдущей стадии) отмывают и добавляют в лунки конъюгат пероксидазы хрена с антителами к FITC . При добавлении хромогенного субстрата развивается окраска. 

Результат оценивают визуально, фотографируют или получают изображение при помощи видеосистемы, либо анализируют на микропланшетном фотометре с использованием стандартной процедуры cut - off . 

Этап анализа, «Пронто»

Затраченное время

Пробоподготовка Dynal /«стандартная»

20 мин/~1 час

ПЦР

1,5 часа

ПостПЦР-обработка

40 мин

Элонгация зонда

20 мин

Детектирование

30 мин

Преимущества методологии Пронто:

  • стандартизация – для анализа мутаций во всех наборах используется одна и та же процедура в одном и том же микропланшетном формате;
  • возможно одновременное определение нескольких мутаций;
  • анализ осуществляется не по опосредованным маркёрам, а непосредственно по первичной последовательности геномной ДНК;
  • результат демонстрирует гомо- или гетерозиготность по определяемой мутации, а не только её наличие;
  • детектирование происходит аналогично широко распространённой процедуре иммуноферментного анализа, без проведения электрофореза;
  • маркируется в ЕС «для диагностики in vitro .
  • продолжительность анализа – в пределах 5 часов. 
Справочник составлен специалистами ЗАО - "БиоХимМак".

Каталог продуктов для клинической лабораторной диагностики

  Главная     Лабораторная диагностика     Контакты     ЯроЛаб,
2010